FLORASAN IN SITU HYBRİDİZASYON(FISH) METODU
Sitogenetik, araştırmacıların kromozomlar
üzerindeki spesifik DNA dizilerinin konumlarını tespit etmelerine olanak
tanıyan bir prosedür olan in situ hibridizasyonun getirilmesiyle moleküler çağa
girdi. 1969'daki ilk yerinde hibridizasyon deneylerinden (Gall & Pardue,
1969) bu yana, prosedürün birçok varyasyonu geliştirildi ve hassasiyeti muazzam
bir şekilde arttı. Günümüzde çoğu in situ hibridizasyon prosedürü, DNA
dizilerini saptamak için floresan problar kullanır ve işlem genellikle FISH
(floresan yerinde hibridizasyon) olarak adlandırılır. Hastalardaki birçok
kromozomal anormalliği teşhis etmek için bunları kullanan sitogenetikçiler için
çeşitli FISH prosedürleri mevcuttur. FISH'in ve diğer tüm in situ hibridizasyon
yöntemlerinin başarısı, DNA çift sarmalının olağanüstü stabilitesine bağlıdır.
In Situ Hibridizasyon, Kromozomlar
Üzerindeki DNA Dizilerini Lokalize Etmek İçin Kullanılır
1953'te James Watson ve Francis Crick, DNA
çift sarmalındaki iki antiparalel ipliği bir arada tutan kapsamlı hidrojen
bağları ağını tanımladılar (Watson & Crick, 1953). Bugün okul çocukları
bile bir DNA ipliğindeki adenin tamamlayıcı DNA ipliğindeki timine bağlandığını
ve sitozinin de aynı şekilde guanine bağlandığını biliyor. Bu bazlar arasında
oluşan birçok hidrojen bağı nedeniyle, çift sarmal dikkat çekici derecede
kararlı bir yapıdır. Dahası, sarmalı bir arada tutan hidrojen bağları ısı veya
kimyasallarla kırılırsa, koşullar daha elverişli hale geldiğinde sarmal yeniden
şekillenebilir. DNA sarmalının bu yeniden biçimlenme ya da yeniden doğallaşma
yeteneği, moleküler hibridizasyon için temel sağlar.
Moleküler hibridizasyonda, biyolojik bir
numunede dizinin doğal olarak oluşan karşılığını tanımlamak veya ölçmek için
bir sonda olarak etiketlenmiş bir DNA veya RNA dizisi kullanılır. 1960'larda
araştırmacılar Joseph Gall ve Mary Lou Pardue, moleküler hibridizasyonun DNA
dizilerinin yerinde (yani bir kromozom içindeki doğal konumlarında) konumunu
belirlemek için kullanılabileceğini fark ettiler. Aslında, 1969'da iki bilim
adamı, ribozomal bir DNA dizisinin radyoaktif kopyalarının bir kurbağa
yumurtasının çekirdeğindeki tamamlayıcı DNA dizilerini tespit etmek için
kullanılabileceğini gösteren dönüm noktası niteliğindeki bir makale
yayınladılar. Bu orijinal gözlemlerden bu yana, birçok iyileştirme prosedürün
çok yönlülüğünü ve duyarlılığını, in situ hibridizasyonun artık sitogenetikte
önemli bir araç olarak kabul edildiği ölçüde artırmıştır.
Floresan Problar Sunuldu
Gall ve Pardue'nun çalışmasından kısa bir
süre sonra, flüoresan etiketler, daha fazla güvenlik, kararlılık ve tespit
kolaylığı nedeniyle hibridizasyon problarındaki radyoaktif etiketleri hızla
değiştirdi (Rudkin & Stollar, 1977). Aslında, en güncel in situ
hibridizasyon FISH prosedürleri kullanılarak yapılır (Trask, 2002; Speicher
& Carter, 2005). Bir DNA dizisinin saptanması, samanlıkta iğne aramakla
karşılaştırılabilir; iğne ilgilenilen DNA dizisidir ve samanlık bir dizi
kromozomdur. Araştırmacının güçlü bir "mıknatısı" varsa bu arama çok
daha kolay hale gelir - bu durumda, ilgilenilen DNA dizisinin floresan bir
kopyası. Hibridizasyon, "mıknatıs" "iğne" ile
karşılaştığında gerçekleşir; bu, Şekil 1'de gösterildiği gibi hem bir sonda hem
de bir hedef gerektirir. Şekilde, genellikle bir klonlanmış DNA parçası olan sonda
dizisi kırmızı ile gösterilmiştir. Hedef DNA - cam slayt üzerindeki kromozomlar
- mavi renkte (sağ sütunda) gösterilir. DNA sarmalının iki ipliğini birleştiren
hidrojen bağları siyah çizgilerle temsil edilir.
İşlemdeki ilk adım, prob dizisinin (Şekil
1b, orta sütun) floresan bir kopyasını veya prosedürün daha sonra floresan
haline getirilebilen prob dizisinin değiştirilmiş bir kopyasını (Şekil 1b, sol
sütun) yapmaktır. Daha sonra, herhangi bir hibridizasyon gerçekleşmeden önce,
hem hedef hem de prob dizilerinin ısı veya kimyasallarla denatüre edilmesi
gerekir (Şekil 1c). Bu denatürasyon adımı, sonraki hibridizasyon adımı
sırasında hedef ve prob arasında yeni hidrojen bağlarının oluşması için
gereklidir. Prob ve hedef sekanslar daha sonra birlikte karıştırılır (Şekil 1d)
ve prob, kromozom üzerindeki tamamlayıcı sekansına spesifik olarak hibridize
olur. Prob zaten floresan ise (orta sütun), hibridizasyon bölgesini doğrudan
tespit etmek mümkün olacaktır. Diğer durumlarda (sol sütun), hibridize probu
görselleştirmek için ek bir adım gerekebilir. Problar ve bunların kromozomal
hedefleri arasında oluşan hibritler, bir floresan mikroskop kullanılarak tespit
edilebilir.
Şekil 1: Floresan in situ hibridizasyonun
(FISH) ilkeleri.
(a) FISH'in temel öğeleri bir DNA probu ve
bir hedef dizidir. (b) Hibridizasyondan önce DNA probu, nick çevirisi, rastgele
hazırlanmış etiketleme ve PCR gibi çeşitli yollarla etiketlenir. Yaygın olarak
iki etiketleme stratejisi kullanılır: dolaylı etiketleme (sol panel) ve
doğrudan etiketleme (sağ panel). Dolaylı etiketleme için, problar bir hapten
içeren modifiye edilmiş nükleotidlerle etiketlenirken, doğrudan etiketlemede
bir florofor içermek üzere doğrudan modifiye edilmiş nükleotidler kullanılır.
(c) Etiketli prob ve hedef DNA denatüre edilmiştir. (d) Denatüre probu ve
hedefi birleştirmek, tamamlayıcı DNA sekanslarının tavlanmasına izin verir. (e)
Prob dolaylı olarak etiketlenmişse, bir enzimatik veya immünolojik saptama
sistemi kullanan floresan olmayan haptenin görselleştirilmesi için ekstra bir
adım gerekir. FISH, doğrudan etiketlenmiş problarla daha hızlıyken, dolaylı
etiketleme, birkaç antikor katmanı kullanarak sinyal amplifikasyonunun
avantajını sunar ve bu nedenle, arka plan seviyelerine kıyasla daha parlak bir
sinyal üretebilir.
© 2005 Nature Publishing Group Speicher,
M. R. ve diğerleri. Yeni sitogenetik: moleküler biyoloji ile sınırları
bulanıklaştırma. Nature Reviews Genetics 6, 784 (2005). Tüm hakları Saklıdır.
Araştırmacılar bir FISH deneyi
tasarlarken, deney için gereken hassasiyet ve çözünürlüğün floresan
mikroskopisinin teknik sınırları içinde olup olmadığını düşünmeleri gerekir.
Duyarlılık, belirli mikroskobun ışık toplama yeteneğine bağlıdır ve bu, büyük
hedef dizilere göre görülmesi daha zor olan küçük hedef dizilerinin tespit
edilip edilemeyeceğini belirler. Çözünürlük, bir kromozomun uzunluğu boyunca
iki nokta arasında ayrım yapma yeteneğini ifade eder. Sonuç olarak, ışık
mikroskobu, görünür ışık spektrumunun alt sınırı olan 200-250 nm'den daha az
ayrılan nesneleri çözemez. Bu teknik sınırlar göz önünde bulundurularak,
araştırmacıların kromozom içindeki DNA'nın yapısını da dikkate almaları
gerekir. Metafaz kromozomları, fazlar arası kromozomlardan binlerce kat daha
sıkıştırılmıştır ve bu da çıplak DNA'dan en az on kat daha sıkıştırılmıştır.
(DNA sarmalının 3,4 nm'lik bir dönüşünün 10 baz DNA çiftine karşılık geldiğini
unutmayın.) Tüm bu faktörler bir arada düşünüldüğünde, araştırmacılar tipik
olarak metafaz kromozomları üzerindeki pozisyonlar için megabaz aralığında
çözünürlük ve aralığında çözünürlük elde etmeyi beklerler. fazlar arası
kromozomlar için on binlerce kilobaz…
FISH, klonlanmış bir DNA dizisinin metafaz
kromozomları üzerindeki yerini belirlemek için güçlü bir araç sağlar. Şekil 2a,
klonlanmış bir DNA sekansının normal metafaz kromozomlarına hibridize edildiği
tipik bir FISH deneyinin sonuçlarını gösterir. Kırmızı bantlar, karakteristik
bant desenleriyle tanımlanabilen iki homolog kromozom üzerindeki hibridizasyon
bölgelerinde tespit edilir. Daha yakından inceleme, her kırmızı bandın aslında
bir mitotik kromozomdaki iki kardeş kromatide karşılık gelen iki noktadan
oluştuğunu gösteriyor. Uzman bir sitogenetikçi, prob dizisini kromozom
üzerindeki bilinen diğer genlerin birkaç megabazı içine yerleştirmek için bu
hibridizasyon verilerini bantlama modeli ile birlikte kullanabilir.
Tarihsel olarak, FISH ve diğer in situ
hibridizasyon sonuçları, insan kromozomları üzerindeki genlerin
haritalanmasında birincil rol oynadı. Bu deneylerden elde edilen sonuçlar veri
tabanlarında toplandı ve derlendi ve bu bilginin İnsan Genomu Projesi'nin (HGP)
açıklama aşamasında faydalı olduğu kanıtlandı. Artık HGP tamamlandığına göre,
araştırmacılar bir insan geninin kromozomal konumunu belirlemek için nadiren in
situ hibridizasyonu kullanırlar. (Genom dizilenmemiş türlerde, bununla
birlikte, FISH ve ilgili in situ hibridizasyon yöntemleri, genlerin kromozomlar
üzerindeki konumlarının haritalanması için önemli veriler sağlamaya devam
etmektedir.) Şu anda, insan FISH uygulamaları esas olarak klinik tanılara yöneliktir.
(a) FISH kullanılarak, sekans etiketli bir bakteriyel yapay kromozomun
fragmanlarının hibritlendiği (kırmızı) sitogenetik bantlarda (gri) floresan
sinyaller gözlenir. (b) Bant konumu temelinde seçilen bir klon, çoklu
konjenital malformasyonlar ve zeka geriliği olan bir hastada 11 ve 19 numaralı
kromozomları içeren bir translokasyonun kırılma noktasını haritalamak için FISH
analizinde kullanılır. Klon, 19. kromozom üzerindeki kırılma noktasını kapsar;
bu nedenle kırmızı sinyal, türev 11 ve türev 19 kromozomları arasında bölünür
ve normal kromozom 19'da bulunur.
© 2001 Nature Publishing Group Cheung, V. G. ve diğerleri. İnsan genomunun
taslak dizisine sitogenetik işaretlerin entegrasyonu. Nature 409, 954 (2001).
Tüm hakları Saklıdır.
Karyotipler ve FISH Kullanarak Kromozomal
Anormallikleri Teşhis Etme
FISH ve diğer in situ hibridizasyon
prosedürleri, delesyonlar, duplikasyonlar ve translokasyonlar dahil olmak üzere
çeşitli kromozomal anormalliklerin klinik tanısında önemlidir. Şekil 2b, bir
hasta translokasyonunu analiz etmek için araştırmacıların standart karyotipleme
ile birlikte FISH kullandıkları bir örneği göstermektedir. Hibridizasyon probu,
translokasyon kırılma noktasını içerdiğinden şüphelenilen bir kromozom 19
segmentine karşılık geldi. Floresan görüntüde üç hibridizasyon alanı
belirgindir. Bir nokta hastanın normal kromozom 19 kopyasına (nl19) karşılık gelir
ve diğer iki nokta, translokasyon sırasında üretilen kromozom 11 ve 19'un
değiştirilmiş veya türetilmiş (der) versiyonlarına karşılık gelir. Böylece,
araştırmacılar verileri hem 19. kromozomdaki kırılma noktası bölgesini
daraltmak hem de translokasyona dahil olan ikinci kromozomu tanımlamak için
kullanabildiler.
Şekil 2b'de kullanılan hibridizasyon
probu, HGP'den bilim topluluğunun kullanımına sunulan binlerce bakteriyel yapay
kromozom (BAC) klonundan biriydi. Günümüzde sitogenetikçiler, karyotiplerde ortaya
çıkan kromozomal yeniden düzenleme alanlarını kesin olarak tanımlamak için
kapsamlı HGP klon kaynaklarını kullanabilmektedir. Aslında, bir bilim insanı
konsorsiyumu, HGP'den insan kromozomları üzerindeki spesifik bantlara 7.000'den
fazla DNA klonunu haritaladı (BAC Research Consortium, 2001). Kromozomal
DNA'nın her megabaz segmenti için en az bir klon mevcuttur. (Tek istisna Y
kromozomudur, çünkü nispeten gen açısından fakirdir.)
Tüm Kromozomları "Boyamak" için
FISH Prob Koleksiyonlarını Kullanma
Bölgeye özgü problarla kromozom yeniden
düzenlemelerinin tespiti (Şekil 2b), özellikle karmaşık yeniden düzenlemeler
meydana geldiyse veya yeniden düzenlenen bölgelerin bir karyotipteki bant
desenleriyle tanımlanması zorsa, uzun bir çaba olabilir. Neyse ki, sitogenetikçiler
artık potansiyel yeniden düzenlemeler için bir dizi metafaz kromozomunu hızlı
bir şekilde taramak için multifluor FISH veya spektral karyotipleme kullanma
seçeneğine sahiptir (Speicher ve diğerleri, 1996; Schrock ve diğerleri, 1996).
Multifluor FISH, her bir kromozomun farklı bir renge boyanmış gibi göründüğü
bir karyotip oluşturur. Her "boya" aslında belirli bir kromozomun
uzunluğunu kapsayan diziler için bir hibridizasyon probları koleksiyonudur.
Multiflor FISH ile, araştırmacılar önce
her kromozom için prob olarak kullanılmak üzere bir DNA dizisi koleksiyonu
hazırlar. Şekil 3a'da, prob kromozomları akış sitometrisi ile fiziksel olarak
birbirinden ayrılmıştır. (Bugün, araştırmacılar muhtemelen her bir kromozom
için ticari olarak mevcut DNA koleksiyonlarını kullanacaklardır.) Bir sonraki
adımda, DNA örnekleri, her kromozom için benzersiz bir renk üreten florokrom
kombinasyonlarıyla etiketlenir. (Şekildeki Cot-1 DNA aşaması, tüm kromozomlara
bağlanan tekrarlayan DNA dizilerini [örneğin, sentromerik DNA] uzaklaştırır.)
Floresan hibridizasyon probları daha sonra metafaz kromozomları ile
birleştirilir ve hibridize edilir. Şekil 3b, hibridizasyondan sonra bir
mikroskopta görünecekleri haliyle, fazlar arası ve metafaz kromozomlarının
görüntülerini göstermektedir. İnsan gözlerine, metafaz kromozomlarının birçoğu
aynı renge sahip gibi görünür, ancak görüntünün dijital olarak işlenmesi,
kromozomlar arasındaki spektral farklılıkları ayırt eder. Normal bir insan
kromozomu (Şekil 3b), uzunluğu boyunca tek tip bir renge sahip olacaktır, ancak
yeniden düzenlenmiş bir kromozom, çizgili bir görünüme sahip olacaktır.
Kromozom boyaları, metafaz
yayılmalarındaki büyük kromozom değişikliklerinin hızlı değerlendirilmesine
izin verse de, yöntemin çözünürlüğü sınırlıdır. Bu nedenle, kromozom boyama,
araştırmacıların translokasyonlarda yer alan kromozomları hızlı bir şekilde
tanımlamasına ve büyük silmeleri ve / veya kopyaları tanımlamasına izin
verirken, küçük delesyonlar ve kopyalar tespit edilemez. Araştırmacılar, kromozomal
yeniden düzenlemelerde yer alan gerçek diziler hakkında daha ayrıntılı bilgiye
ihtiyaç duyarlarsa, daha önce açıklandığı gibi bölgeye özgü probları takip
etmeleri gerekir (Şekil 2).
Floresan in situ hibridizasyon (FISH) ile
DNA dizilerinin sitogenetik lokalizasyonu.
© 2014 Paneller a) ve b) © 2000 Cambridge
University Press'ten değiştirilmiştir. McNeil, N. & Ried, T. Karmaşık
kromozomal yeniden düzenlemeleri tanımlamak için yeni moleküler sitogenetik
teknikler: moleküler tıpta teknoloji ve uygulamalar. Moleküler Tıpta Uzman
İncelemeleri (çevrimiçi: Eylül 2000). Tüm hakları Saklıdır.
Interfaz Kromozomları Analiz Etmek İçin
FISH Kullanımı
Şekil 4: Fazlar arası çekirdeklerdeki
kromozomal anormallikleri tespit etmek için FISH kullanma.
(a) Charcot-Marie-Tooth sendromuna neden
olan küçük bir kromozom 17 bölümünün kopyalanması, bu çekirdekte iki yerine üç
kırmızı sinyalin ortaya çıkmasından anlaşılmaktadır. Yeşil noktalar,
çoğaltmanın dışındaki bir diziyi işaretler. (b) Philadelphia kromozomunda BCR
(kromozom 22 üzerinde) ve ABL (kromozom 9 üzerinde) genlerinin bir füzyonunu
oluşturan translokasyon, bir çift yeşil ve kırmızı sinyalin yakın yan yana gelmesinden
anlaşılır. Bu sinyaller, sırasıyla bu iki genin yakınında bulunan diziler için
FISH probları kullanılarak oluşturulmuştur. der (22), Philadelphia
kromozomudur. Her panelin altındaki şemada sadece normal ve anormal
kromozomların ilgili kısımları gösterilmektedir.
© 1986 Cold Spring Harbor Laboratory Press
Gray, J. W., et al. İnsan kromozomlarının akış karyotiplemesi ve
sınıflandırılması. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology 51,
141–149 (1986). Tüm hakları Saklıdır. Çizim, Sistem Biyolojisi Enstitüsü'nden
Ger van den Engh'in izniyle kullanılmıştır. Tüm hakları Saklıdır.
FISH'in piyasaya sürülmesinden bu yana,
sitogenetikçiler, karyotiplerde kullanılan metafaz kromozomlarının yanı sıra
fazlar arası kromozomları da analiz edebildiler (Trask, 2002). Bu,
kromozomların analiz için hazırlanabilmesi için hücrelerin birkaç gün veya
hafta kültürlenmesi gerekmediğinden gerçek bir pratik avantaj sunar. Ek olarak
FISH, klinik açıdan büyük ilgi gören ancak sık bölünmeyen katı tümörler gibi
örneklerden alınan kromozomları analiz etmek için kullanılabilir. FISH'in diğer
bir kullanışlı özelliği, hibridizasyon probları farklı floroforlarla
etiketlenmişse araştırmacıların aynı anda birden fazla bölgeyi
izleyebilmeleridir.
Şekil 4, kromozom anormalliklerini teşhis
etmek için fazlar arası FISH'in nasıl kullanılabileceğine dair iki örneği
göstermektedir. Şekil 4a, Charcot-Marie-Tooth hastalığı (CMT) tip 1A olan bir
hastadan alınan bir fazlar arası çekirdeği gösterir (Lupski ve diğerleri,
1991). CMT tip 1A, sinir aksonlarını çevreleyen miyelin kılıfındaki
proteinlerden birini kodlayan, kromozom 17 üzerindeki bir gende bir
duplikasyonun neden olduğu nispeten yaygın bir nörolojik durumdur. Şekil 4a'da,
hastanın hücresi, yinelenen bölgenin dışında uzanan kromozom 17 üzerindeki bir
diziye karşılık gelen yeşil bir sonda ile birlikte yinelenen bölge içindeki bir
diziye karşılık gelen kırmızı etiketli bir sonda ile hibridize edilmiştir. İki
yeşil sinyalden, çekirdek içinde kromozom 17'nin iki kopyasını bulmak
mümkündür. Bir kromozom normal konfigürasyona sahipken, ikincisi der (17),
yakınlardaki iki kırmızı sinyalden anlaşılan kopyalanmış bölgeyi içerir. Şekil
aynı zamanda, FISH arası fazın bir başka önemli özelliğini de açıklamaya hizmet
etmektedir. Fazlar arası kromatin, mitotik kromatinden yaklaşık 10.000 kat daha
az sıkıştırılmış olduğundan, der (17) üzerindeki kopyalanmış bölgeleri ayrı
noktalar olarak çözmek mümkündür. Bu küçük yinelemenin mitotik kromozomlarda
çözülmesi zor olurdu.
Şekil 4b, kronik miyelojenöz lösemiden
muzdarip bir hastada bir kromozomal translokasyonun varlığını saptamak için
kullanılan bir FISH analizini gösterir (Tkachuk ve diğerleri, 1990). Bu
hastalığın çoğu vakasında, ABL proto-onkojenini içeren bir kromozom 9 segmenti,
karşılıklı bir translokasyon sırasında 22. kromozomdaki kırılma noktası küme
bölgesi (BCR) ile birleşir. Philadelphia kromozomu olarak da bilinen türetilmiş
kromozom 22 veya der (22), güçlü BCR promotörünün ABL onkogen transkriptinin
sentezini yöneterek kansere yol açtığı bir BCR-ABL füzyon geni içerir. Şekil
4b, BCR'yi çevreleyen yeşil etiketli bir hibridizasyon probu ABL'yi çevreleyen
kırmızı etiketli bir prob ile birlikte uygulandığında BCR-ABL füzyonlarının FISH
tarafından kolayca tanımlanabileceğini gösterir. Bu görüntüde, kromozom 9 ve
22'nin normal kopyaları sırasıyla kırmızı ve yeşil noktalar olarak tespit
edilir. Öte yandan, Philadelphia kromozomu, her iki tarafında kırmızı ve yeşil
alt bölgeleri olan merkezi bir sarı bölgeye sahip gibi görünen karmaşık bir
kaynaşmış nokta olarak görülebilir. (Floresan mikroskopide sarı, kırmızı ve
yeşil probların çok yakınlığının bir göstergesidir, öyle ki üst üste biniyormuş
gibi görünürler.) Kaynaşmış noktanın karmaşık alt yapısı, fazlar arası
kromozomlarda tespit edilebilir, ancak benzer bir FISH analizinde çözülemez.
metafaz kromozomları. Bu nedenle, iki renkli fazlar arası FISH, önceki bir
hücre kültürüne ihtiyaç duymadan kromozom füzyon olaylarını analiz etmek için
hassas bir yöntem sağlar.
FISH ara yüzünün başka bir araştırma
uygulaması, çekirdek içindeki kromozomların organizasyonu hakkında bilgi elde
etmek için kromozoma özgü boyalardan yararlanır. Şekil 2a (üst sol), kromozoma
özgü boyalarla boyanmış bir fazlar arası çekirdeği göstermektedir. Şekilden,
kromozomların çekirdek içinde farklı bölgeleri işgal ettiği görülebilir.
Araştırmacılar, kromozoma özgü probları gen spesifik problar ve antikorlarla
yaratıcı bir şekilde birleştirerek nükleer mimari hakkında heyecan verici yeni
bilgiler sağlamak için FISH'i kullanabilir.
REFERANS
BAC Resource Consortium. Integration of cytogenetic
landmarks into the draft sequence of the human genome. Nature 409,
953–958 (2001) (link to article)
Gall, J. G., & Pardue, M. L. Formation and detection
of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proceedings of
the National Academy of Sciences 63, 378–383 (1969)
Lupski, J. R., et al. DNA duplication
associated with Charcot-Marie-Tooth disease type 1A. Cell 66,
219–232 (1991) doi:10.1016/0092-8674(91)90613-4
Parra, I., & Windle, B. High resolution visual
mapping of stretched DNA by fluorescent hybridization. Nature Genetics 5,
17–21 (1993) doi:10.1038/ng0993-17 (link to article)
Rudkin, G. T., & Stollar, B. D. High resolution of
DNA-RNA hybrids in situ by indirect immunofluorescence. Nature 265,
472–474 (1977) doi:10.1038/265472a0 (link to article)
Schrock, E., et al. Multicolor spectral
karyotyping of human chromosomes. Science 273, 494–497
(1996) doi:10.1126/science.273.5274.494
Speicher, M. R., Ballard, S. G., & Ward, D. C.
Karyotyping human chromosomes by combinatorial multi-fluor FISH. Nature
Genetics 12, 368–375 (1996) doi:10.1038/ng0496-368 (link to article)
Speicher, M. R., & Carter, N. P. The new
cytogenetics: Blurring the boundaries with molecular biology. Nature
Reviews Genetics 6, 782–792 (2005) doi:10.1038/nrg1692 (link to article)
Tkachuk, D. C., et al. Detection
of BCR-ABL fusion in chronic myelogenous leukemia by in
situ hybridization. Science 250, 559–562
(1990) doi:10.1126/science.2237408
Trask, B. J. Human cytogenetics: 46 chromosomes, 46 years
and counting. Nature Reviews Genetics 3, 769–778 (2002)
doi:10.1038/nrg905 (link to article)
Watson, J. D., & Crick, F. H. C. Molecular structure
of nucleic acids: A structure for deoxyribose nucleic acid. Nature 171,
737–738 (1953)
Yorumlar
Yorum Gönder